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實(shí)驗(yàn)方法——抗體檢測(cè)常用的幾種方法

一、直接法

將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。

1. 優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

2. 缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào)，但不是每種抗體都適合做符號(hào)，費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。

二、間接法

此測(cè)定辦法與直接法相似，不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào)，改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來測(cè)定抗原量。

1. 優(yōu)勢(shì)：二抗能夠加強(qiáng)信號(hào)，并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它多的免疫反響性。

2. 缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

三、雙抗體夾心法

被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶符號(hào)后直接測(cè)定抗原的量;或不符號(hào)，再透過酶符的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗原部位。

1. 優(yōu)勢(shì)：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。

2. 缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。

四、根據(jù)細(xì)胞法(xin ELISA技術(shù)) 是一種新的定性蛋白檢測(cè)技術(shù)，將細(xì)胞直接在微孔板里培育，待檢測(cè)時(shí)，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。

1. 優(yōu)勢(shì)：無需裂解細(xì)胞，所以方針蛋白丟失zui少，可測(cè)定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

2. 缺陷：不能測(cè)定抗原量。

五、競(jìng)爭(zhēng)法

樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠越多的抗體，而固定抗原就只能到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對(duì)照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

1. 優(yōu)勢(shì)：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

2. 缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。